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蜂毒肽抗HSV-1病毒作用的机理研究

时间:2020-02-11   来源:本站   访问量:155

      蜂毒肽抗HSV-1病毒作用的机理研究

      杨文超1 戴荣国1  吴珍红2  缪晓青2
       1重庆市畜牧科学院蜂业研究所;2福建农林大学蜂疗研究所

      摘要:


    【目的】探索蜂毒肽抗HSV-1病毒作用的机理。 


     【方法】体外实验测定蜂毒肽对HSV-1病毒的杀死作用,病毒吸附、合成和释放的抑制作用,考察蜂毒肽对P21WAF1/CIPI和P53蛋白表达的调节作用。

 

    【结论】研究结果表明蜂毒肽没有直接杀死HSV-1病毒的作用,但是对HSV-1病毒的吸附、合成和释放均有明显的抑制作用,蜂毒肽调节可用P21WAF1/CIPI和P53蛋白表达,调节细胞周期,保护细胞DNA免受HSV-1的损伤。

      关键词:蜂毒肽;HSV-1;


      作用机理

      蜂毒肽是蜂毒起药理作用的主要成分,具有抑菌、抗炎、消肿止痛、抗辐射、抑肿瘤和抗艾滋病病毒的作用,蜂毒肽对心脑血管系统、神经系统、分泌系统和血液循环系统等也有不同程度的药理作。研究发现蜂毒肽具有抗HSV-1病毒作用。本文拟对蜂毒肽抗HSV-1病毒的机理进行探索。

      1 实验材料

      DMEM培养基、胰酶、新生牛血清、双抗(上海生工);平衡盐液;PBS液;噻唑蓝(MTT);细胞培养板、细胞培养瓶(上海丹曦试剂);蜂毒肽(蜂毒经葡聚糖凝胶G-25,G-50,G-75层析并经标准品鉴定得到、其他试剂均为分析纯。KD202C石蜡切片机〈浙江金华科迪〉,显微镜;防脱玻片(中山金桥生物),兔抗鼠P53、兔抗鼠P21WAF1/CIPI(北京博奥森),生物素化标记山羊抗兔IG、3% H202、封闭液、S-A/HRP、DAB染色试剂盒(上海锐聪),中性树胶、免疫组化油笔、苏木精体细胞快速染色液(福州迈新),318C酶标仪(上海三科)。

      2 试验步骤

      2.1蜂毒肽对病毒作用

      设计4个药物抗HSV-1病毒作用靶点实验组,4个实验组分别是蜂毒肽与病毒直接作用组、蜂毒肽抗病毒吸附组、蜂毒肽抗病毒生物合成组和蜂毒肽抗病毒释放组。

      2.2免疫组化实验

      昆明种小鼠随机分为8组:蜂毒肽高、中、低剂量组,病毒对照组,正常细胞组。每组10只,经腹腔注入100 LD50病毒悬液0.05 ml/只。另设正常对照组,注射生理盐水0.05 ml/只。第2、3d,分别腹腔注射蜂毒肽、阿昔洛韦、生理盐水,剂量均为0.05 ml/只。 取脑组织,固定、洗涤、脱水与硬化,脱酒精、包埋、切片、粘片、脱蜡和复水。抗原修复、血清封闭、 加一抗、加二抗、加S-A/HRP,加DAB显色剂、复染和脱水、封片、镜检与分析。

      3 实验结果

      通过R-M法计算蜂毒肽的细胞毒性为“病毒的半数感染量 ”。

      3.1蜂毒肽对病毒作用

      蜂毒肽对HSV-1病毒的作用结果见下表。

      表1蜂毒肽与病毒的直接作用 (略)


      表2蜂毒肽对病毒吸附的影响 (略)

      表3蜂毒肽对病毒合成的影响 (略)

      表4蜂毒肽对病毒释放的影晌 (略)

      蜂毒肽没有直接杀死HSV-1病毒的作用,但是对HSV-1病毒的吸附、合成和释放均有明显的抑制作用。

      3.2免疫组化实验

      结果表明 :蜂毒肽没有直接杀死HSV-1病毒的作用,但是对HSV-1病毒的吸附、合成和释放均有明显的抑制作用,蜂毒肽调节可用P21WAF1/CIPI和P53蛋白表达,调节细胞周期,保护细胞DNA免受HSV-1的损伤。


      4 结论与讨论

      蜂毒肽通过对HSV-1病毒的吸附、合成和释放的抑制,减少了病毒对脑细胞DNA的整合,P21蛋白阳性率增高,表明了细胞内DNA损伤程度降低,正常细胞数量增多,正常细胞周期比例增大。二者综合考虑可以看出,蜂毒肽可以有效减少因HSV-1病毒引起的非正常细胞周期的数量,提高正常细胞数量,进而保护受HSV-1病毒侵染的小鼠脑组织。

      中国蜂业 2010年第61卷第12期

      参考文献 (略)


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