蜂毒肽抗HSV-1病毒作用的机理研究
     杨文超1  戴荣国1   吴珍红2   缪晓青2
         1重庆市畜牧科学院蜂业研究所；2福建农林大学蜂疗研究所

摘要：
【目的】探索蜂毒肽抗HSV-1病毒作用的机理。
【方法】体外实验测定蜂毒肽对HSV-1病毒的杀死作用，病毒吸附、合成和释放的抑制作用，考察蜂毒肽对P21WAF1/CIPI和P53蛋白表达的调节作用。
【结论】研究结果表明，蜂毒肽没有直接杀死HSV-1病毒的作用，但是对HSV-1病毒的吸附、合成和释放均有明显的抑制作用，蜂毒肽调节可用P21WAF1/CIPI和P53蛋白表达，调节细胞周期，保护细胞DNA免受HSV-1的损伤。
  关键词:蜂毒肽；HSV-1；作用机理

  蜂毒肽是蜂毒起药理作用的主要成分，具有抑菌、抗炎、消肿止痛、抗辐射、抑肿瘤和抗艾滋病病毒的作用，蜂毒肽对心脑血管系统、神经系统、分泌系统和血液循环系统等也有不同程度的药理作。研究发现蜂毒肽具有抗HSV-1病毒作用。本文拟对蜂毒肽抗HSV-1病毒的机理进行探索。

  1实验材料

  DMEM培养基、胰酶、新生牛血清、双抗（上海生工）；平衡盐液；PBS液;噻唑蓝（MTT）；细胞培养板、细胞培养瓶（上海丹曦试剂）；蜂毒肽(蜂毒经葡聚糖凝胶G-25,G-50,G-75层析并经标准品鉴定得到、其他试剂均为分析纯。KD202C石蜡切片机〈浙江金华科迪〉，显微镜；防脱玻片(中山金桥生物)，兔抗鼠P53、兔抗鼠P21WAF1/CIPI(北京博奥森)，生物素化标记山羊抗兔IG、3％ H202、封闭液、S-A/HRP、DAB染色试剂盒(上海锐聪)，中性树胶、免疫组化油笔、苏木精体细胞快速染色液(福州迈新)，318C酶标仪(上海三科)。

  2试验步骤

  2.1蜂毒肽对病毒作用
  设计4个药物抗HSV-1病毒作用靶点实验组，4个实验组分别是蜂毒肽与病毒直接作用组、蜂毒肽抗病毒吸附组、蜂毒肽抗病毒生物合成组和蜂毒肽抗病毒释放组。 

  2.2免疫组化实验
  昆明种小鼠随机分为8组:蜂毒肽高、中、低剂量组，病毒对照组，正常细胞组。每组10只，经腹腔注入100 LD50病毒悬液0.05 ml/只。另设正常对照组，注射生理盐水0.05 ml/只。第2、3d，分别腹腔注射蜂毒肽、阿昔洛韦、生理盐水，剂量均为0.05 ml/只。
  取脑组织，固定、洗涤、脱水与硬化，脱酒精、包埋、切片、粘片、脱蜡和复水。抗原修复、血清封闭、 加一抗、加二抗、加S-A/HRP，加DAB显色剂、复染和脱水、封片、镜检与分析。

  3实验结果
  
  通过R-M法计算蜂毒肽的细胞毒性为…，病毒的半数感染量 …为… 。

  3.1蜂毒肽对病毒作用

  蜂毒肽对HSV-1病毒的作用结果见下表。

  表1蜂毒肽与病毒的直接作用  (略）

  表2蜂毒肽对病毒吸附的影响  (略）

  表3蜂毒肽对病毒合成的影响  (略）

  表4蜂毒肽对病毒释放的影晌  (略）

  蜂毒肽没有直接杀死HSV-1病毒的作用，但是对HSV-1病毒的吸附、合成和释放均有明显的抑制作用。……

  3.2免疫组化实验

  结果表明,…… 

  4结论与讨论

  蜂毒肽通过对HSV-1病毒的吸附、合成和释放的抑制，减少了病毒对脑细胞DNA的整合，P21蛋白阳性率增高，表明了细胞内DNA损伤程度降低，正常细胞数量增多，正常细胞周期比例增大。二者综合考虑可以看出，蜂毒肽可以有效减少因HSV-1病毒引起的非正常细胞周期的数量，提高正常细胞数量，进而保护受HSV-1病毒侵染的小鼠脑组织。

       中国蜂业 2010年第61卷第12期