1.南京中医药大学药学院 方栋 张蕾 孙娟 吴文瀚 乔宏志 狄留庆
　　      2.江苏省中药高效给药系统工程技术研究中心方栋 张蕾 乔宏志 狄留庆
　　      3.南京市中药微丸产业化工程技术研究中心方栋 张蕾 乔宏志 狄留庆

　　摘要：

　　目的：制备具有协同抗肿瘤作用的茶多酚-蜂毒肽纳米复合物（EMN)，并考察其抗肿瘤活性。

　　方法：通过拜耳反应合成了多聚表没食子儿茶素没食子酸酯（polyEGCG）；和H-NMR和MS表征其结构和相对分子质量。通过正交试验优化EMN的制备工艺，并考察在不同pH值条件下蜂毒肽（Mel)的体外释放。通过流式细胞仪比较异硫氰酸荧光素（FITC）标记的Mel和EMN的细胞摄取情况。MTT法考察polyEGCG和Mel在B16F10和A549细胞的协同抗肿瘤效应

。
　　结果：合成的polyEGCG用H-NMR和MS确证了结构，正交试验优化的EMN最佳制备工艺为将0.5mg/mL polyEGCG溶液逐滴加入到1mg/mL等体积的Mel溶液中，边滴加边搅拌，室温孵育30min，即得。体外释放实验表明EMN释放具有酸响应性。摄取实验表明Mel和EMN均能被肿瘤细胞摄取，摄取量相当。MTT实验结果表明，polyEGCG和Mel联合使用的协同系数（CI)小于1.0，具有协同抗肿瘤效果。

　　结论： 采用自组装的方式制备EMN，工艺简单，粒径适宜，且具有协同抗肿瘤的效果，值得深入研究。

　　关键词：药辅合一；蜂毒肽；茶多酚；纳米复合物；表没食子儿茶素没食子酸酯；体外释放；细胞摄取；抗肿瘤；协同效应；正交试验；MTT法；自组装

　　中图分类号：R283.6
　　文献标志码：A
　　文章编号：0253-2670(2017)16-3300-08


　　讨论

　　中药毒肽具有明确的抗肿瘤效果，然而其对细胞毒性的选择性差，直接使用常会带来严重的毒副作用；中药毒肽属于外源性生物制品，具有一定的免疫原性，易导致过敏反应；多肽类药物在体内稳定性较差，易被酶降解，在某些生理环境下可发生聚集沉淀而失效；多肽药物在血液中半衰期较短，iv后短时间内就被清除或降解，为了达到药效剂量，常需要频繁给药，给病人带来诸多的不便。为了解决毒肽药物的上述成药性问题，开发安全、高效的递药系统，本课题选用Mel作为模型药物，并利用polyEGCG的多肽识别作用，复合制备了EMN。正交试验考察了复合比例、pH值和复合温度对EMN平均粒径的影响，优化了工艺条件。制备的EMN为类球形，分布均一。体外释放实验表明EMN在中性生理环境下，Mel释放量较少（＜10%），而在酸性环境下（如肿瘤微环境或溶酶体环境），Mel加速释放。这有利于提高Mel的安全性和肿瘤区域的定位释放效果。体外细胞毒性实验研究了Mel与polyEGCG合用的抗肿瘤效果，证明EMN对多种肿瘤均有明显的抑制作用，二药联用可发挥协同效应。上述结果表明，本课题构建的“药辅合一”EMN，充分利用了二者结构和功能的互补性，既减少了无效载体的应用，又实现了联合用药协同增效的目的，对中药毒肽类活性成分新制剂的开发和临床应用具有较好的借鉴意义。

　　参考文献 （略）