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蜂毒的主要成分及药理作用的研究进展
日期:2022/1/16 12:01:28    点击次数:555次
蜂毒是存在于蜜蜂毒囊中、由毒腺分泌的无色芳香液体,其化学成分复杂,主要成分包括蜂毒肽、蜂毒明肽、肥大细胞脱粒肽、磷脂酶A2、透明质酸酶等多种活性物质。 1蜂毒的历史 蜂毒是一种成分复杂且药理作用较多的混合物,关于用“药蜂针”治疗风湿病在中国古代民间早有记载。明代方以智在《物理小识》第五卷中介绍了利用蜂毒制作“药蜂针”的方法:“取黄蜂之尾针,合硫炼,加水麝为药,置疮疡之头,以火点而灸之”。用蜂蜇治病的方法在古代欧美诸国同样流行,据出土文物记载,古埃及、印度、罗马等过都曾用蜂毒治疗风湿病以及痛风性关节炎。 2蜂毒的主要成分 2.1蜂毒肽(MLT) 蜂毒肽是蜂毒中最主要的多肽,由26个氨基酸残基组成,药理作用广泛且具有较高的生物学活性,约占蜂毒干重的50%左右。由于蜂毒肽具有强溶血性,故又称为溶血肽。20世纪70年代,Kindas-Mügge等就已经从蜂王的毒腺中成功地提取到了蜂毒的总mRNA,并且证明了其中80%是蜂毒肽mRNA。同时又将提取到的mRNA注射到了青蛙的卵母细胞中,以此合成了蜂毒肽前体蛋白。1983年,Vlassk等利用质粒pBR322并采用反转录的方法来构建蜂王毒腺cDNA文库,并用提取到的蜂王毒腺总mRNA来制作探针进行杂交,从构建的cDNA文库中分离得到了蜂毒肽的cDNA。 2.2蜂毒明肽(Apamin) 蜂毒明肽是一种含有18个氨基酸残基的多肽,约占蜂毒干重的2%~3%。Hugues的研究表明蜂毒明肽是一种可以通过血脑屏障作用于中枢神经系统的神经毒素。1995年,Gmachl等克隆和测定了意大利蜜蜂蜂毒明肽的cDNA序列,建立了意大利蜜蜂工蜂毒腺的cDNA文库,并从中筛选出前明肽原基因的cDNA序列。 2.3肥大细胞脱粒肽(MCDP) 肥大细胞脱粒肽是一种含有22个氨基酸残基的多肽,约占蜂毒干重的2%左右。肥大细胞脱粒肽的生物学效应是相互拮抗的,一方面,肥大细胞脱粒肽能够使细胞脱颗粒沉淀,释放出组胺和5-羟色胺,发挥抗炎作用;另一方面,低浓度的肥大细胞脱粒肽可以促使肥大细胞脱粒,从而引发炎性反应。1995年,Gmachl等从构建的蜂毒毒腺cDNA文库中筛选出了肥大细胞脱粒肽原基因的cDNA序列。2003年,张素方等则首次采用RT-PCR的方法来克隆意大利蜜蜂与中华蜜蜂的肥大细胞脱粒肽原基因,最终证明两者的cDNA序列一致。 2.4磷脂酶A2(PLA2) 磷脂酶A2是蜂毒中重要的活性成分,约占蜂毒干重的8%~12%。1954年Kuchler等首次发现了蜂毒中有磷脂酶A2的存在。磷脂酶A2可以与具有溶血性的蜂毒肽发生共同作用产生强溶血性,故又被称为“间接的溶血毒素”。 2.5透明质酸酶(Hya) 透明质酸酶是蜂毒中的主要过敏源,约占蜂毒干重的2%~3%。透明质酸酶的生物活性强,可以为蜂毒的渗透和扩散打开通道,故又被称为蜂毒的“扩散因子”。Gmachl等从已构建的蜂毒毒腺cDNA文库中证明了意大利蜜蜂蜂毒中的透明质酸酶含有349个氨基酸残基。 3蜂毒的主要药理作用 蜂毒应用广泛,具有多种药理学活性,主要包括抗炎、抗肿瘤、镇痛、降血压、抗菌等。 3.1抗炎 蜂毒中最主要的抗炎成分是单体多肽,它能够使毛细血管的通透性下降,抑制白细胞移行以及前列腺素E2的合成,并且能够促进肾上腺激素的分泌,起到抗风湿、类风湿性关节炎的作用。张金禄等将86例膝骨性关节炎(OA)患者随机分为两组:治疗组采用蜂针治疗;对照组则采用美洛昔康片和盐酸氨基葡萄糖胶囊口服,观察蜂针治疗OA的临床疗效。结果发现治疗组的总有效率为93.02%;对照组的总有效率为86.04%,两组之间的差异具有统计学意义(P<0.05),说明蜂针治疗OA具有更好的临床疗效。 刘喜德等将100例患有类风湿性关节炎(RA)的患者随机分为蜂针治疗组(蜂针疗法加西药治疗组)和西药对照组,给药3个月后观察蜂针疗法对RA的临床疗效,结果发现蜂针治疗组的总有效率为90.0%,西药对照组的总有效率为74.0%,且两组之间的差异具有统计学意义(P<0.05),可见蜂针疗法治疗类风湿性关节炎具有较好的疗效。目前,认为蜂毒抗炎的作用机制主要有:消炎镇痛作用、改善微循环、免疫调节作用以及促进肾上腺皮质激素分泌。 3.2抗肿瘤 近年来的研究表明蜂毒抗肿瘤的机制主要有3类:直接杀伤肿瘤细胞、免疫调节作用以及诱导肿瘤细胞凋亡。张启明等通过用胡蜂毒素对荷瘤模型小鼠(S180)进行治疗,发现荷瘤模型小鼠的生命期显著延长,更有部分小鼠可以长期生存,证明了胡蜂毒素具有直接杀伤小鼠肿瘤细胞的作用,同时对肿瘤也有一定的治疗作用。 朱萱萱等通过计算蜂毒对S180肉瘤模型小鼠T淋巴细胞酯酶染色率的影响,发现0.63mg·kg-1以及0.32mg·kg-1的蜂毒均可以使阳性淋巴细胞的染色率增加,证明了蜂毒可以使T淋巴细胞功能增强。众多研究表明,蜂毒中的蜂毒肽具有明显的抗肿瘤生物活性,可诱导多种实验性肿瘤细胞凋亡,如肝癌细胞系BEL-7402、胃癌细胞系SGC-790、人骨肉瘤细胞MG63等。 3.3镇痛 杨毓麟等以吗啡和安替比邻作为对照,通过化学刺激法以及电刺激法研究蜂毒的镇痛作用,实验证实了蜂毒确有镇痛作用。虽然蜂毒的镇痛强度与吗啡相差甚大,却比安替比邻高出几十倍,且镇痛持续的时间较长。而杨明等通过热板法观察蜂毒对小鼠痛阈值影响的实验,表明蜂毒多肽可以明显提高小鼠痛阈值,同样证实了蜂毒多肽具有镇痛作用。研究表明,蜂毒中的低分子多肽是蜂毒具有镇痛作用的主要成分,其中,蜂毒肽具有神经阻断作用,所以蜂毒对于坐骨神经痛、偏头痛、三叉神经痛、关节疼痛等也可以起到较好的镇痛作用。应用镇痛药配合蜂毒治疗原发性肝癌比仅给予镇痛治疗的镇痛效果更好,持续时间更长,总的疗效也更好。 3.4降血压 徐济良等通过多种动物实验证明了0.1mg·kg-1的磷脂酶A2对麻醉动物有明显的降压作用。其降压机制研究表明,蜂毒中的主要成分磷脂酶A2可以作用于外周,导致血浆组胺的浓度明显增加,通过释放组胺改变外周阻力来实现降压作用。蜂毒中的蜂毒肽同样具有降低血压的作用,其作用机理为破坏正常的肥大细胞,使其解体并释放组胺,最终实现降压作用。 3.5抗菌 伊琳娜·塔图等将蜂毒溶液接种到培养细菌或真菌的培养基中,在适宜的培养条件下培养48h和72h,观察灭菌情况。结果发现,浓度为78μg·mL-1的蜂毒溶液可以抑制金黄色葡萄球菌的生长,而浓度为150μg·mL-1的蜂毒溶液具有杀灭该菌的作用;浓度为150μg·mL-1的蜂毒溶液可以一直化脓链球菌的生长,而浓度为310μg·mL-1的蜂毒溶液则可以完全杀灭该菌;浓度为310μg·mL-1的蜂毒溶液可以抑制大肠杆菌和蜡状芽孢杆菌的生长,而浓度为620μg·mL-1的蜂毒溶液则具有灭菌作用;浓度为620μg·mL-1的蜂毒溶液对侧芽孢杆菌有抑制作用,而浓度为1200μg·mL-1的蜂毒溶液具有杀菌作用。由于蜂毒对各种细菌或真菌的敏感性各不相同,故相同浓度下的抑菌和杀菌作用强度略有差异,但实验证明蜂毒确有杀菌作用。 3.6抗凝 刘星等通过观察蜂毒对家兔体外抗凝血活性影响的试验,发现蜂毒可以明显增长血液的凝固时间,具有很强的抗凝血作用,其中,蜂毒肽是主要的抗凝血活性成分。目前的研究普遍认为蜂毒抗凝血的作用机制与血小板、凝血因子或其他方面的影响有关。蜂毒能够抑制血小板的凝集功能,同时也可以抑制凝血致活酶的产生或使凝血致活酶失去活性,血纤维蛋白的溶解活性增高,导致正常的凝血过程被破坏。 3.7改善微循环 吴围屏等通过给大鼠快速静注10%高分子右旋糖苷(HMWD)来复制急性血管微循环障碍的试验模型,并采用静脉注射纯化后的蜂毒来观察其改善微循环的作用。试验结果表明,在急性血管微循环障碍模型成功复制后,立即静脉注射2mL纯化后的蜂毒(0.117g·L-1),5~10min后可见部分微血管开始灌流,团块状血液的边缘逐渐开始松散。15min后,部分微血管、微静脉、毛细血管开始恢复血流,这时候的血流呈现出泥沙样。30min后微静脉、微动脉血流较慢呈现粒线流状。这些现象均说明蜂毒可明显改善微循环,促使微血管灌流变得通畅。 4展望 蜂毒用于治疗疾病已有几百年的历史,其主要成分蜂毒肽、蜂毒明肽、磷脂酶A2等均具有广泛的药理学作用,可有效地治疗多种疾病。我国拥有非常丰富的蜂毒资源,但对于蜂毒药理以及临床应用的研究、开发和利用却还不够深入。蜂毒广泛的药理作用以及临床应用具有广阔的研究前景,我国应加速开展蜂毒在临床医学、生物工程以及其他领域的各项研究。 (来源:药学研究.2016,35(03),蜂毒的主要成分及药理作用的研究进展,张冰清,刘晓波,大理大学药学与化学学院)
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